PROSEDUR DI LAB TEKNIK HISTOLOGI & PERWARNAAN H&E

TEKNIK HISTOLOGI-PROSEDUR DI LAB TEKNIK HISTOLOGI

	TAJUK
	PENYEDIAAN TISU HISTOPATOLOGI DAN FIKSASI GROSSING  PEMOTONGAN TISU  PEMPROSESAN TISU PENANAMAN BLOK TISU  COOLING  MIKROTOM PENGANPUNGAN  PENGERINGAN DALAM OVEN PERWARNAAN H & E MOUNTING

1.0 PENYEDIAAN TISU HISTOPATOLOGI DAN FIKSASI

PRINSIP

Dalam proses pengambilan sampel , bahagian tisu yang diambil samada
biopsy , FNA @ pembedahan dihantar ke makmal bagi menjalankan 
proses histopatologi yang seterusnaya. Fiksasi adalah untuk 
mengelakkan perubahan bentuk dan juga isipadu pada tisu. 
Tisu yang di fiksasikan bertujuan bagi penyimpanan dan bagi 
memudahkan proses pendiagnosan sesuatu penyakit.

RADAS/ BAHAN

I. Dissection set ( Scalpel , Forcep , Gunting , Dissection 
Board , Pin )

II. Cholorofom

III. Normal saline

IV. Formalin 10%

V. Bikar

KAEDAH

PEMBEDAHAN

ORGAN

GINJAL	JANTUNG
PARU-PARU	HATI

1.0 GROSSING

Dimana tisu di nilai melalui pemerhatia mata kasar. 
Proses ini dilakukan oleh pakar patologi dengan melihat ciri-ciri seperti :

ü Ukuran bahagia tisu

ü Struktur tisu ( warna , perubahan saiz , dan struktur histology )

ü Kesan-kesan fizikal – lesi / bengka

KAEDAH

GAMBAR

1.0 PEMOTONGAN TISU

Dimana tisu yang terpilih akan dipotong pasa saiz 3mm-5mm dengan 
mengunakan skapel di atas papan pemotong. Seterusnya tisu tersebut 
di masukkan ke dalam kaset bagi proses seterusnnya.

ALAT RADAS

I. Dissection set ( Scalpel , Forcep , Gunting , Dissection Board , Pin )

KAEDAH

GAMBAR

1. Organ diukur sebelum dipotong (3mm-5mm)

1. Pemotongan tisu

1.0 PEMPROSESAN TISU

Proses pemprosesan tisu merupakan langkah penting dalam proses 
penyendiaan tisu histopatologi. Terdapat empat proses dalam 
pemprosesan tisu iatu Dehidrasi, Permbersihan, Impregnasi Dan Embedding.

RADAS/BAHAN

I. Botol universal , forcep

II. Larutan alcohol 70% , 95% , 100%

III. Larutan xylene

IV. Lilin paraffin

V. Mesin penanaman , moulder, kaset tisu

KAEDAH

dilakuak pemprosesan tisu dengan merendam tisu yang fi fiksasikan ke 
dalam larutan dlam jadual di bawah :

BOTOL	LARUTAN	MASA (JAM )
1	Alkohol	½
2	Alkohol	½
3	Alkohol	½
4	Alkohol	1
5	Alkohol	1
6	Alkohol	1
7	Xylene	1
8	Xylene	2

Dilakukan impregnasi dengan merendam dalam lilin paraffin (5jam )

Dijalankan proses penanman tisu dengan mengunakan mesin penanaman

di bekukan blok tisu sebelum menjalankan proses pemotongan

GAMBAR

Proses impregnasi	Proses penanaman tisu

1.0 PENANAMAN BLOK TISU

Proses penanaman tisu merupakan satu proses untuk menyediakan 
tisu dalam bentuk blok tisu bagi memudahkan proses pemotongan .

RADAS/ BAHAN

I. tisu yang telah diimpregnasikan dalam lilin paraffin

II. Imbedding center , coolin unit

KAEDAH

GAMBAR

1.0 COOLING  Merupakan proses untuk memberikan kekerasan yang konsisten pada  blok tisu sebelum pemotongan. Serta mempercepatkan pengerasn lilin paraffin. KAEDAH Selepas proses penaman tisu , moulder di alih ke tisu cooling  unit untuk pengerasn blok tisu Dibiarkan mengeras selama 15 minit ,   Selepas blok tisu betul-betul keras dipisahkan blok dari mouder BLOK TISU  masalah yang terdapat pada tisu : a) Pembentukan dwi-lapisan : ini berlaku lilin dibiarkan mengeras  lama ketika proses penanaman b) Pembentukan warna keputihan pada blok tisu : disebabkab oleh  penyejukan pelahan dan tidak seragam c) Bahagian terdapat bahagian yang lembut : disebabkan oleh  penyejukan yang tidak serangam d) Permukaan blok yang tidak sekata : disebabkan oleh pengunaan  moudel yang tidak bersih , memyebabkan masih lagi terdapat lilin  paraffin dan semasa proses penyejukan atas cooling unit yang tidak  sekata. 1.0 MIKROTOM  Proses pemotongan dengam mengunakana microtom adalah  bertujuan untuk menghasilakn hirisan potongan tisu yang  bersaiz 3-5 µ, Seterusnya section tisu diletakkan di atas slaid  bagi proses perwarnaan.mikrotom adalah alat yang direka untuk  memotong tisu secara seragam untu dilihat dibawah mikroskop.  RADAS/BAHAN I. blok tisu paraffin yang telah disedia II. mikrotom , pisau mikrotom , waterbath (tetap suhu air pada -60oC III. serbuk albumin IV. thermal unit, oven(tetap suhu pada 50-60oC KAEDAH GAMBAR 2.0 PENGAMPUNGAN  Pengampungan section tisu berfungsi untuk menengangkan dan  meratakan section sebelum dilekatkan pada salaid. Section yang telah  dipotong dipindahkan ke dalam tissue floating bath. Tissue floating  bath biasanya mempunyai suhu air sekitar 45-60oC (20C lebih rendah  daripada takat lebur lilin ) Selama 30-60 saat. Pencingan boleh  dilakukan seterusnnya. KAEDAH  GAMBAR  Pemindahan section pada tissue floating bath 2. Proses pemancingan section (fishing ) 3. Pengeringan section dalam oven , suhu 60oC selama ½ jam 3.0 PENGERINGAN DALAM OVEN Sectiona tisu yang telah diletakkan pada slaid perlu di  keringkan bagi mengeluarkan air , lebiham lilin dan juga  memastikan lekatan tisu pada slaid adalah baik.  Ini dilakukan dengan meletakkan slaid tisu di dalam oven pada  suhu 450c-600c selama lebih ½ jam . selepas itu, Slaid boleh  dikeluarkan dan bersedia untuk prose perwarnaan . KAEDAH  GAMBAR   4.0 PERWARNAAN H&E  Perwarnaan hematoxylin dan eosin (H&E) adalah dianggap  perwarnaan universal kerana dapat mewrnkana hamper  semua struktur histology dan digunkan secara meluas dalam bidang  histology RADAS /BAHAN  I. Copping Jar , Forcep , Coverslip , DPX II. Alcohol 100%, 95% , 70%, Xylene  III. Air Paip KAEDAH GAMBAR  · Dilakukan perwarnaan H&E   KEPUTUSAN  Slaid ginjal 5.0 MOUNTING  adlaha teknik yang dilakukan selepas proses perwarnaan dimana slaid yang tekah diwarnakan akan dilekatkan dengan sisisp kaca mengaunakan media pelekatan seperti DXP .Bertujuan untuk melindungi section tisu supaya bertahan lama, memberikan kekemasan slaid tisu yang diwarnakan dan memyediakan permukaan lutsinar/transparent apabila di lihat di bawah mikroskop cahaya KAEDAH GAMBAR